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當抗原材料中的干擾物質不易除掉，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競賽與固相抗原結合。

標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反響呈色淺于陰性反響。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質，直接包被不易成功，可選用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然后參加抗原，構成固相抗原。

洗刷除掉抗原中的雜質，然后再加標本和酶標抗體進行競賽結合反響。競賽法測抗體有多種形式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競賽結合，抗HBc 。

ELISA一般選用此法。另一種形式為將標本與抗原一起參加到固相抗體中進行競賽結合，洗刷后再參加酶標抗體，與結合在固相上的抗原反響。抗HBe的檢測一般選用此法。 
 
小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，能夠選用競賽法形式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競賽與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多，結合在固相上的酶標抗原愈少，終的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。